Locus  

Purificação e caracterização parcial de lectina obtida de couve-flor (Brassica oleracea var. Botrytis) e potenciais ações biológicas

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dc.creator Abranches, Monise Viana
dc.date.accessioned 2015-03-26T12:10:43Z
dc.date.available 2014-03-11
dc.date.available 2015-03-26T12:10:43Z
dc.date.issued 2013-04-30
dc.identifier.citation ABRANCHES, Monise Viana. Purification and partial characterization of lectin obtained from cauliflower (Brassica oleracea var. Botrytis) and potential biological actions. 2013. 49 f. Tese (Doutorado em Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2013. por
dc.identifier.uri http://locus.ufv.br/handle/123456789/262
dc.description.abstract As lectinas são proteínas capazes de interagir de forma seletiva e reversível com carboidratos. As interações proteína-carboidrato estão envolvidas em muitos processos biológicos, atuando como mediadoras de várias atividades celulares, que incluem: interação célula-célula, célula-matriz, controle do crescimento celular e a apoptose. Além disso, tais interações estão implicadas no desenvolvimento de doenças. Adicionalmente, as lectinas podem promover a eliminação de agentes não próprios pela opsonização e parecem ativar a resposta imune inata. Nesse estudo foi purificada e parcialmente caracterizada uma lectina de couve-flor (Brassica oleracea var. Botrytis). A atividade dessa proteína contra a viabilidade de células tumorais (MDA-MB-231, MCF-7 e HepG2) e sobre a ativação de macrófagos foi avaliada. O processo de purificação da lectina envolveu três etapas cromatográficas (por afinidade em coluna Hitrap Blue HP, por troca catiônica em coluna Hitrap CaptoS e exclusão por peso molecular em coluna Sephadex 200 HR 10/30). Sua massa molecular foi estimada por SDS-PAGE sob condições redutora e não redutora, bem como após tratamento com PNGase. A atividade da proteína sobre eritrócitos humanos e de carneiro, em diferentes temperaturas e valores de pH, na presença de diferentes cátions bivalentes, e sua capacidade de se ligar a diferentes carboidratos foi investigada. A sequência de aminoácidos da porção N-terminal da proteína foi analisada por degradação de Edman em sequenciador automático de proteína (modelo PPSQ-33A, Shimadzu). A viabilidade das células tumorais na presença da lectina pelo ensaio com MTT. Adicionalmente, foi realizado ensaio de fagocitose por macrófagos e estimada a produção de H2O2 e NO- sob a influência da lectina. As etapas cromatográficas proporcionaram uma purificação de 139 vezes. A análise por SDS-PAGE em condições redutora e não redutora revelou uma única banda estimada em 34 kDa. Não foi observada diferença de massa quando a lectina foi previamente tratada com PNGase. Observou-se que a proteína foi capaz de hemaglutinar eritrócitos de humanos (Grupos O e B) e de carneiro. A atividade máxima da proteína se manteve até 60 oC e entre os valores de pH 7 e 8. A lectina apresentou especificidade de ligação a carboidratos complexos (fetuína e asialofetuína) e teve sua atividade hemaglutinante melhorada pelo Mg. A sequência N-terminal da lectina encontrada foi ETRAFREERPSSKIVTIAG. A lectina reduziu a viabilidade das linhagens MDA-MB-231 e HepG2, mas o mesmo não foi constatado para a linhagem MCF-7. Na presença da lectina a fagocitose foi estimulada, bem como a produção de H2O2 e NO-. É sugerido que a proteína estudada é uma nova lectina que pode inibir a proliferação das células MDA-MB-231 e HepG2. Além disso, essa lectina também pode ser explorada como agente imunoestimulador, capaz de auxiliar a imunidade inata, favorecendo a remoção de antígenos não próprios. pt_BR
dc.description.abstract The lectins are proteins that interact selectively and reversibly with carbohydrates. Protein-carbohydrate interactions are involved in many biological processes, such as mediator of several cellular activities including cell-cell and cell-matrix recognition, control the cellular growing and apoptosis. Moreover, these interactions are implicated in the development of diseases. Additionally, the lectins can promote foreign agents elimination by opsonization and it seems activating the innate immune response. In this study, a lectin of cauliflower has been purified and partially characterized (Brassica oleracea var. Botrytis). In addition, the protein activity against the viability of tumor cells (MDA-MB-231, MCF-7 e HepG2) and on macrophages activation has been assessed too. The lectin purification involved three chromatographic steps (FPLC-affinity on a Hitrap Blue HP column, FPLC-cation exchange on a Hitrap CaptoS column and HPLC-molecular weight exclusion chromatography on a Sephadex 200 HR 10/30 column). The protein molecular mass was estimated by SDS-PAGE under reducing and non-reducing conditions and after PNGase treatment. The protein activity on human and sheep erythrocytes in different temperature and pH conditions, in the presence of divalent cations, and the protein ability to bind different carbohydrate were investigated. The N-terminal amino acid sequence was analyzed by Edman degradation method in the Shimadzu PPSQ-30 Series Protein Sequencer. The viability of tumor cells in the presence of lectin was investigated by MTT assay. Furthermore, it was performed the macrophage phagocytosis assay and it assessed H2O2 and NO- production under influence of lectin. The purification steps have provided a 139-fold purification. The SDS-PAGE analysis in reducing and non-reducing conditions revealed a single band estimated at 34 kDa. It was not observed any difference in the molecular mass when the lectin was previously treated with PNGase. It was noted that the protein was able to cause hemagglutination of human (O and B groups) and sheep erythrocytes. The protein optimal activity was maintained until 60 OC and between pH 7 and pH 8. The lectin presented a binding specificity to complex carbohydrates (fetuin and asialofetuin) and the Mg has improved the lectin hemagglutinating activity. The N-terminal sequence of the encountered lectin was ETRAFREERPSSKIVTIAG. The lectin reduced the viability of the MDA MB 231 and HepG2 bloodlines, but it did not reduce the viability of the MCF-7 cells. In the presence of lectin the phagocytosis was stimulated, as well as H2O2 and NO- production. It is suggested that the studied protein is a new lectin that can inhibit MDA-MB-231 and HepG2 proliferation. In addition, this lectin can also be probed like immunostimulant agent, capable to help the innate immunity, favoring the clearance of non-self-agents. eng
dc.description.sponsorship Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
dc.format application/pdf por
dc.language por por
dc.publisher Universidade Federal de Viçosa por
dc.rights Acesso Aberto por
dc.subject Aglutinina por
dc.subject Cromatrografia por
dc.subject Imunobiologia por
dc.subject Glicobiologia por
dc.subject Carboidrato por
dc.subject Câncer por
dc.subject Resposta Imune por
dc.subject Agglutinin eng
dc.subject Cromatrografia eng
dc.subject Immunobiology eng
dc.subject Glycobiology eng
dc.subject Carbohydrate eng
dc.subject Cancer eng
dc.subject Immune Response eng
dc.title Purificação e caracterização parcial de lectina obtida de couve-flor (Brassica oleracea var. Botrytis) e potenciais ações biológicas por
dc.title.alternative Purification and partial characterization of lectin obtained from cauliflower (Brassica oleracea var. Botrytis) and potential biological actions eng
dc.type Tese por
dc.contributor.advisor-co1 Cardoso, Silvia Almeida
dc.contributor.advisor-co1Lattes http://lattes.cnpq.br/6041368188542057 por
dc.publisher.country BR por
dc.publisher.department Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos por
dc.publisher.program Doutorado em Biologia Celular e Estrutural por
dc.publisher.initials UFV por
dc.subject.cnpq CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL por
dc.creator.lattes http://lattes.cnpq.br/7853243994333324 por
dc.contributor.advisor1 Oliveira, Leandro Licursi de
dc.contributor.advisor1Lattes http://lattes.cnpq.br/0578231392218162 por
dc.contributor.referee1 Fietto, Luciano Gomes
dc.contributor.referee1Lattes http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8 por
dc.contributor.referee2 Silva, Cynthia Canedo da
dc.contributor.referee2Lattes http://lattes.cnpq.br/7077220592875119 por
dc.contributor.referee3 Peluzio, Maria do Carmo Gouveia
dc.contributor.referee3Lattes http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723914H4 por
dc.contributor.referee4 Carvalho, Fernanda Caroline de
dc.contributor.referee4Lattes http://lattes.cnpq.br/7041224953031065 por


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