Concentração de proteína solúvel por bradford revela diferenças no metabolismo de plantas de ora-pro-nobis em diferentes doses de nitrogênio

Abstract

O ora-pro-nobis (Pereskia aculeata Mill.) é um alimento rico em proteínas, muito utilizado no meio rural e com importância crescente na indústria de alimentos e farmacológica. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração de proteínas pelos métodos de Bradford e Kjeldahl, em folhas de plantas de ora-pro-nobis submetidas a diferentes doses de adubação nitrogenada, comparando estes métodos. As folhas das plantas de ora-pro-nobis adubadas com diferentes doses de N (0, 50, 100, 200 e 400 kg de N/ha) foram coletadas aos 423 dias após o plantio (DAP). Para o método de Bradford, as folhas foram trituradas com nitrogênio líquido e maceradas em Tris-HCl 50 mM, pH 7,0, o homogenato centrifugado e a proteína solúvel determinada no sobrenadante. Para avaliar o perfil proteico, as amostras dos diferentes tratamentos foram separadas por SDS-Tricina-PAGE 14%. O método de Kjeldahl tradicional foi realizado usando-se o fator de correção 6,25. Os resultados por ambos os métodos indicaram que houve alterações nas concentrações e composição de proteínas presentes em função da disponibilidade de N no solo. A proteína total por Kjeldahl aumentou até a dose de 100 kg de N/ha, e a proteína solúvel por Bradford aumentou nas doses de N entre 50 e 200 kg/ha. Pelo SDS-Tricina-PAGE, verificou-se aumento da intensidade das bandas consonante com o método de Bradford. Estes resultados sugerem que a avaliação de proteínas solúveis pelo método de Bradford permite detectar diferenças no metabolismo das plantas de ora-pro-nobis, expressando informações biológicas relevantes para estudos fisiológicos e nutricionais.

Ora-pro-nobis (Pereskia aculeata Mill.) is a protein-enriched food, widely used in rural communities, presenting increasing importance in the food and pharmaceutics industries. The aim of this study was to determine the protein concentration by the Bradford and Kjeldahl methods in plant leaves of ora-pro-nobis under different nitrogen fertilizer levels, comparing these methods. Leaves of ora-pro-nobis from plants fertilized with different nitrogen levels (0, 50, 100, 200, and 400 kg N/ha) were harvested at 423 days after planting (DAP). For the method of Bradford, the leaves were grounded in liquid nitrogen and macerated in 50 mM Tris-HCl, pH 7.0, the homogenate was centrifuged and the soluble proteins were determined in the supernatant. To evaluate the protein profile, samples of the different treatments were separated by 14% SDS-Tricine-PAGE. The traditional method of Kjeldahl was performed using the correction factor 6.25. For both methods, the results indicated that there were changes in the concentration and composition of proteins present for different availability of N in the soil. The total protein by Kjeldahl increased up to the level of 100 kg N/ha, and the soluble protein by Bradford increased in N levels between 50 and 200 kg/ha. By SDS-Tricine-PAGE, there was an increase in intensity of bands in line with the Bradford method results. These results suggest that the evaluation of the soluble protein by the Bradford method allows assessing differences in the metabolism of ora-pro-nobis plants, expressing biological information that was relevant to physiological and nutritional studies.