Locus  

Expressão heteróloga, purificação e busca de inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi

Show simple item record

dc.creator Moura, Christiane Mariotini
dc.date.accessioned 2015-03-26T13:04:12Z
dc.date.available 2011-06-29
dc.date.available 2015-03-26T13:04:12Z
dc.date.issued 2010-07-26
dc.identifier.citation MOURA, Christiane Mariotini. Heterologous expression, purification and search for inhibitors of the NTPDase-1 of Trypanosoma cruzi. 2010. 53 f. Dissertação (Mestrado em Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2010. por
dc.identifier.uri http://locus.ufv.br/handle/123456789/2327
dc.description.abstract A Doença de Chagas é uma antropozoonose causada por Trypanosoma cruzi, um protozoário flagelado da ordem Kinetoplastida. T. cruzi possui em sua superfície uma ectonucleotidase denominada NTPDase-1. As ectonucleotidases da família E-NTPDases são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados, que podem ser degradados a nucleosídeos por outras ectonucleotidases. Os nucleotídeos extracelulares atuam como sinalizadores em vários processos celulares, como modulação da resposta imune de hospedeiros mamíferos. A hidrólise de ATP extracelular possui papel na infectividade e virulência do T. cruzi, bem como para outros parasitos, como Leishmania, Trichomonas, Toxoplasma, Entamoeba e outros. Por isso, as NTPDases são consideradas um alvo em potencial para o desenho racional de novas drogas para uso no tratamento da doença de Chagas. Neste trabalho realizamos a purificação parcial da NTPDase-1 e produzimos anticorpos policlonais contra ela. Além disso, avaliamos a estabilidade da sua atividade com relação à temperatura e tempo de armazenamento, estado de oligomerização, padronizamos um ensaio de inibição enzimática e realizamos uma triagem de análogos sintéticos de adenina como possíveis inibidores da NTPDase-1. Foi possível observar que a temperatura de armazenamento influenciou a atividade enzimática ao longo do tempo, sendo a temperatura de 4ºC a que melhor preservou tal atividade. A amostra protéica purificada é heterogênea, apresentando oligômeros inativos e monômeros e/ou dímeros ativos. A atividade ATPásica pode ser inibida por adenina e análogos e essa inibição parece ser do tipo competitiva. pt_BR
dc.description.abstract The Chagas’ Disease is an antropozoonose caused by Trypanosoma cruzi, a flagellate protozoan of order Kinetoplastida. T. cruzi presents an ectonucleotidase on its surface, named NTPDase-1. The ectonucleotidases of the E-NTPDase family are enzymes capable of hydrolyse nucleotides tri and/or diphosphates that can be degraded to nucleosides by other ectonucleotidases. Extracellular nucleotides act as signaling molecules in several celullar processes, such as modulation of immune response of mammalian hosts. The ATPe hydrolysis plays a role on T. cruzi infectivity and virulence, as in other parasites such as, Leishmania, Trichomonas, Toxoplasma and Entamoeba. Therefore, NTPDases are taken as potencial targets for the rational design of new drugs for the treatment of Chagas’ disease. In this work we performed the parcial purification of TcNTPDase-1 and produced polyclonal antibodies against it. Futhermore, we evaluated the stability of its activity with respect to time and temperature of storage, standardized an inhibition assay and performed a screening of synthetic adenine analogues as potential inhibitors of NTPDase-1. It was observed that the storage temperature influenced the enzyme activity over time, and temperature of 4 º C was the most efficient to preserve this activity. The purified protein sample is heterogeneous, with inactive oligomers and active monomers and/or dimers. The ATPase activity can be inhibited by adenine and analogues and this inhibition seems to be competitive. eng
dc.description.sponsorship Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
dc.format application/pdf por
dc.language por por
dc.publisher Universidade Federal de Viçosa por
dc.rights Acesso Aberto por
dc.subject Expressão heteróloga por
dc.subject Purificação por
dc.subject Busca de inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi por
dc.subject Heterologous expression eng
dc.subject Purification eng
dc.subject Search for inhibitors of the NTPDase-1 of Trypanosoma cruzi eng
dc.title Expressão heteróloga, purificação e busca de inibidores da NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi por
dc.title.alternative Heterologous expression, purification and search for inhibitors of the NTPDase-1 of Trypanosoma cruzi eng
dc.type Dissertação por
dc.contributor.advisor-co1 Oliveira, Leandro Licursi de
dc.contributor.advisor-co1Lattes http://lattes.cnpq.br/0578231392218162 por
dc.contributor.advisor-co2 Lamêgo, Márcia Rogéria de Almeida
dc.contributor.advisor-co2Lattes http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782197P4 por
dc.publisher.country BR por
dc.publisher.department Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos por
dc.publisher.program Mestrado em Biologia Celular e Estrutural por
dc.publisher.initials UFV por
dc.subject.cnpq CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL por
dc.creator.lattes http://lattes.cnpq.br/4211005796669730 por
dc.contributor.advisor1 Fietto, Juliana Lopes Rangel
dc.contributor.advisor1Lattes http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790238D0 por
dc.contributor.referee1 Marco, Ricardo de
dc.contributor.referee1Lattes http://lattes.cnpq.br/0229339143607870 por
dc.contributor.referee2 Bressan, Gustavo Costa
dc.contributor.referee2Lattes http://lattes.cnpq.br/1153853218347720 por
dc.contributor.referee3 Ramos, Humberto Josué de Oliveira
dc.contributor.referee3Lattes http://lattes.cnpq.br/4037452920080174 por


Files in this item

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record

Search DSpace


Browse

My Account