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dc.contributor.authorFrança, Andressa Antunes Prado de
dc.date.accessioned2015-03-26T13:04:17Z-
dc.date.available2013-06-25
dc.date.available2015-03-26T13:04:17Z-
dc.date.issued2008-07-04
dc.identifier.citationFRANÇA, Andressa Antunes Prado de. Analysis of the expression of desmoglein 1 and desmoplakin in the epithelial cell lines MDCK and MCF-7 before and after a phenotypic growth transition. 2008. 72 f. Dissertação (Mestrado em Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2008.por
dc.identifier.urihttp://locus.ufv.br/handle/123456789/2357-
dc.description.abstractEstudos anteriores identificaram uma alteração no padrão de crescimento de algumas linhagens celulares cultivadas em monocamada, dentre elas as células MDCK, derivadas de epitélio normal de rim de cão, e as células MCF-7, derivadas de carcinoma de mama humana. Nas células MDCK, foi observada uma transição de um comportamento exponencial para um regido por distribuição em leis de potência. Já nas células MCF-7, a transição observada comportou-se de maneira contrária, de uma distribuição em leis de potência para um decaimento exponencial. No presente estudo, foi analisada a expressão da proteína de adesão desmogleína (Dsg) por meio de western blot e imunofluorescência, usando-se amostras das linhagens supracitadas antes e após a transição fenotípica de crescimento. Assim, amostras de MDCK foram retiradas antes de 76 horas e após 146 horas do plaqueamento, e amostras de MCF-7 foram retiradas antes de 64 horas e após 140 horas, para análise da caderina desmossômica. Após a obtenção das quatro amostras, estas tiveram seu perfil protéico caracterizado por meio de eletroforese unidimensional em gel de poliacrilamida a 8%, e em seguida, as proteínas do gel foram transferidas para uma membrana de nitrocelulose, por meio de transferência eletroforética, e a presença da desmogleína foi revelada com solução do anticorpo monoclonal 32-2B, específico para isoforma 1. Os resultados do western blot indicaram que as amostras de MCF-7 apresentavam maior expressão de Dsg1 que as MDCK, sendo que as MCF-7 antes da transição apresentam a maior expressão de Dsg1, e dentre as MDCK, a amostra obtida após a transição apresentou nível mais elevado de Dsg1. Para realização da imunofluorescência, as amostras das duas linhagens foram obtidas nos mesmo tempos citados para as amostras para eletroforese. As células haviam sido plaqueadas sobre lamínulas de 13mm em placas de 24 poços, sendo então fixadas e marcadas com anticorpo primário 11-5F, contra outra proteína desmossômica, a desmoplaquina, e em seguida com anticorpo secundário marcado com FITC. O resultado da imunofluorescência indica maior concentração de proteínas desmossômicas organizadas na membrana celular nas células MCF-7 antes da transição, em relação à amostra retirada após a transição, e nas MDCK, maior marcação após a transição, sendo que, de forma condizente com o resultado do western blot, as células MCF-7 apresentaram marcação mais intensa que as MDCK para as proteínas desmossômicas. Os resultados deste experimento indicam uma relação entre os níveis de expressão da Dsg e o regime de crescimento das linhagens celulares analisadas, de modo que a possível atuação desta proteína em vias de controle do ciclo celular deve ser discutida.pt_BR
dc.description.abstractPrevious studies have identified an alteration in the growth pattern of some established cell lines cultured in monolayer, like MDCK cells, derived from normal canine kidney epithelium, and MCF-7 cells, obtained from human breast carcinoma. On MDCK cells, a transition from an exponential behavior to a power-law distribution was observed. On MCF-7 cells, the observed transition behaved the opposite way, changing from a power law to an exponential decay. In the present study, the expression of the adhesion protein desmoglein (Dsg) was analysed by western blot and immunofluorescence, using samples from the mentioned cell lines before and after the growth phenotypic transition. Thus, samples from MDCK cells were taken before 76 hours and after 146 hours from platting, and samples from MCF-7 cells, before 64 hours and after 140 hours, for the analysis of the desmosomal cadherin. After obtaining the four samples, they had their protein profile characterized by one dimension electrophoresis in poliacrilamide gel 8%, following which the proteins were transferred to a nitrocellulose membrane, by electrophoretic transfer, and the presence of desmogleína was revealed with a solution from the monoclonal antibody 32-2B, specific to isoform 1. The results from the western blot indicate that the samples from MCF-7 presented higher expression of Dsg1 than MDCK. MCF-7 before the transition had the highest expression of Dsg1, and between the samples of MDCK, the one obtained after the transition showed higher expression of Dsg1. In order to perform the immunofluorescence, samples from the two cell lines were obtained in the same time mentioned before. The cells had been platted onto 13mm glass coverslips in 24-well plates, being fixed and marked with primary 11-5F antibody to another desmosome protein, desmoplakin, and then with secondary antibody marked with FITC. The results from immunofluorescence indicate higher concentration of desmosomal proteins in the cell membrane of MCF-7 cells before the transition, in relation to the sample from after the phenotypic growth transition, and in MCDK cells, more intense marking was seen after the transition, considering that the MCF-7 cell presented higher marking than MDCK for desmosomal proteins, in accordance with the results from the western blot. The results from this experiment indicate a relation between the level of expression of Dsg and the growth pattern into the studied cell lines, in such a way that a possible role of this protein in cell cycle control pathways should be further discussed.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
dc.formatapplication/pdfpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Viçosapor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectDesmogleínapor
dc.subjectCultura de célulaspor
dc.subjectPadrões de crescimentopor
dc.subjectDesmogleineng
dc.subjectCells cultureeng
dc.subjectGrowth patterneng
dc.titleAnálise da expressão de desmogleína 1 e desmoplaquina nas linhagens de células epiteliais MDCK e MCF-7 antes e após uma transição fenotípica de crescimentopor
dc.title.alternativeAnalysis of the expression of desmoglein 1 and desmoplakin in the epithelial cell lines MDCK and MCF-7 before and after a phenotypic growth transitioneng
dc.typeDissertaçãopor
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/1081080156647658por
dc.contributor.advisor-co1Martins, Marcelo Lobato
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4789678A0por
dc.contributor.advisor-co2Neves, Clóvis Andrade
dc.contributor.advisor-co2Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785611E1por
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.departmentAnálises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidospor
dc.publisher.programMestrado em Biologia Celular e Estruturalpor
dc.publisher.initialsUFVpor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERALpor
dc.contributor.advisor1Vilela, Marcelo José
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781002D7por
dc.contributor.referee1Paula, Sérgio Oliveira de
dc.contributor.referee1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4por
dc.contributor.referee2Serrão, José Eduardo
dc.contributor.referee2Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785636U6por
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