Efeito do estresse hídrico na expressão de proteínas em duas variedades de soja contrastantes para o conteúdo de óleo e proteína

Abstract

Elucidar os processos bioquímicos e fisiológicos que ocorrem em resposta ao estresse hídrico durante o período de desenvolvimento reprodutivo em plantas é importante para prever os impactos das alterações climáticas sobre a qualidade das sementes. Neste trabalho, as variedades de soja Suprema e UFVTN105AP, de sementes com alto teor de óleo e baixo teor de proteína, e baixo teor de óleo e alto teor de proteína, respectivamente, foram submetidas ao déficit hídrico no estádio R5. Neste ponto, foram analisados parâmetros fisiológicos, coletadas folhas e raízes para análise proteômica, seguida de seqüenciamento em espectrômetro de massa (MALDI-TOF- TOF), e identificação pelo Mascot 4®. Foram realizadas análises de PCR quantitativo em tempo real, sendo a quantificação relativa da expressão gênica feita pelo método 2 - ∆ct, utilizando o termociclador SDS ABI PRISM 7500. As plantas foram re-irrigadas, após este ponto, e foram coletadas sementes em R8 para análise do conteúdo de óleo e proteína por espectrofotometria do infravermelho próximo (FT-NIR). Foi verificado, em sementes de plantas submetidas ao déficit hídrico, uma redução no conteúdo de óleo em ambas as variedades, e um aumento no conteúdo de proteína na variedade Suprema. As duas variedades apresentaram uma redução na expressão de enzimas envolvidas no metabolismo de carbono, como a fosfoglicerato cinase, gliceraldeido 3 fosfato desidrogenase, ferrodixina NADPH redutase, ATP sintase e quinona oxidoredutase, que estão relacionadas com a redução do conteúdo de óleo nas sementes. O aumento na expressão de enzimas relacionadas com o metabolismo do nitrogênio, como Glutamina sintetase, proteína 14-3-3, Vspβ, isoflavona redutase e chalcona isomerase, foram observadas na variedade Suprema, tanto em folhas quanto em raízes, e foram relacionadas com o aumento no conteúdo de proteína na semente. A variedade Suprema, em condições de estresse hídrico, mostrou uma elevada expressão da enzima Glutamina sintetase em folhas, o que não foi observado na UFVTN105AP. Este fato pode estar relacionado com o diferente comportamento das duas variedades em relação ao acúmulo de proteína na semente. Os resultados mostram que alterações na composição de óleo e proteína da semente estão relacionadas com a intensidade e duração do estresse hídrico, e ainda, dependentes da variedade em estudo.

Elucidate the biochemical and physiological processes that occur in response to water stress during plant reproductive development is important for predicting climate impacts on seed quality. In this study, Suprema and UFVTN105AP soybean varieties, which seeds with high oil content and low in protein, and low oil content and high protein content, respectively, were subjected to water deficit in the R5 stage. At this point, physiological parameters were analyzed, leaves and root were collected for two-dimensional gels associated to sequencing by mass spectrometry (MALDI-TOF- TOF), and identification by Mascot ® 4. Real Time Quantitative PCR analyzes were performed, and the relative quantification of gene expression made by 2 - Δct method using the ABI PRISM 7500 SDS thermocycler. Plants were re- watered after this point, and R8 seeds were collected in order to analyze protein and oil content by Near Infrared Spectroscopy (FT- NIR) . Plants subjected to drought have seeds with reduction in oil content in both varieties , and an increase in protein content in the Suprema. Both varieties showed a reduction in the expression of enzymes involved in carbon metabolism , such as phosphoglycerate kinase , glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase, ferrodixin NADPH reductase, ATP synthase, and quinone oxidoreductase , which are related with the reduction of oil content in seeds. The increased expression of enzymes related to nitrogen metabolism, such as glutamine synthetase, protein 14-3-3, Vspβ, isoflavone reductase and chalcone isomerase, were observed in the Supreme variety, both in leaves and in roots, and were related to increase in the protein content of the seed. Suprema in water stress conditions, showed a high expression of glutamine synthetase in leaves, which was not observed in UFVTN105AP. This fact may be related to the different behavior of the two varieties in relation to the accumulation of protein in the seed. The results show that changes in the seed oil and protein content are related to intensity and duration of the drought stress, and depends on the variety of study.