Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://locus.ufv.br//handle/123456789/2399
Tipo: Dissertação
Título: Caracterização funcional de uma provável nucleoporina que interage com a proteína NSP de geminivírus
Título(s) alternativo(s): Functional characterization of a putative nucleoporin-like protein interacting with the geminivirus protein NSP
Autor(es): Fontenelle, Mariana Rodrigues
Primeiro Orientador: Fontes, Elizabeth Pacheco Batista
Primeiro avaliador: Pereira, Maria Cristina Baracat
Segundo avaliador: Loureiro, Marcelo Ehlers
Terceiro avaliador: Fietto, Juliana Lopes Rangel
Quarto avaliador: Zerbini Júnior, Francisco Murilo
Abstract: A família Geminiviridae é uma diversa família de vírus de planta. O Cabbage leaf curl virus (CaLCuV) do gênero Begomovirus possui dois componentes genômicos de DNA fita simples, DNA-A e DNA-B. O DNA-A é requerido para a replicação, ativação transcricional e encapsidação do vírus. O DNA-B é requerido para movimento, sendo que a proteína NSP, codificada pelo mesmo, transporta o DNA viral do núcleo para o citoplasma. Já foi demonstrado que NSP interage com proteínas do hospedeiro, como uma proteína receptora Ser/Tre quinase, denominada NIK ( NSP-interacting kinase ). Nesse estudo foi realizado uma triagem de proteínas que interagem com NSP de CaLCuV, através de um sistema duplo híbrido em leveduras, utilizando uma biblioteca de cDNA de Arabidopsis, e foi isolada uma nucleoporina-like, referida como NAP ( NSP-Associated Protein ). Além disso, foi comprovado que a interação NAP-NSP também ocorre in vitro. A proteína completa, codificada pelo gene At4g13350 possui dois homólogos em Arabidopsis com funções ainda desconhecidas, o At1g08680 e At4g32630. Foi identificado um homólogo em humanos, a proteína hRip, que interage com a proteína Rev de HIV. Para se entender a importância da interação de NAP-NSP, foi identificado um mutante para o gene NAP e foram selecionadas linhagens mutantes homozigotas de Arabidopsis por PCR. A inativação do gene NAP foi confirmada por um RT-PCR, comprovando ser um alelo nulo. Plantas de Arabidopsis selvagens da linhagem Col-0 e mutantes nap foram inoculadas com CaLCuV DNA-A e DNA-B. Ambas as linhagens Col-0 e nap desenvolveram os sintomas típicos de CaLCuV com intensidades semelhantes. A inativação do gene NAP parece não influenciar na infecção do vírus CaLCuV em Arabidopsis, talvez pela presença de homólogos que possam estar desempenhando o papel de NAP ou talvez pela interação NAP-NSP não ser essencial na infecção viral. Estudos em plantas superexpressando o gene NAP foram realizados, constatando que essas plantas apresentaram um discreto aumento na susceptibilidade ao vírus, mostrando sintomas mais severos e maior número de plantas infectadas, comparadas às plantas selvagens.
The family Geminiviridae is a diverse family of plant virus. The Cabbage leaf curl virus (CaLCuV) of Begomovirus genus possess two genomic components of singlestranded DNA, DNA-A and DNA-B. The DNA-A is required for replication, transactivaction and encapsidation of the viral genome. The DNA-B is required for the virus movement, in which NSP is coded. NSP transports the viral DNA from the nucleus to the cytoplasm and has been demonstrated to interact with a plasma membrane receptor-like kinase, designated NIK (NSP-interacting kinase). In this study, we performed a two-hybrid screening for CaLCuV NSP-interacting proteins, using a cDNA library from Arabidopsis and we isolated a nucleoporin-like protein, designated NAP (NSP-Associated Protein). Further more, it was proved in vitro assays that these proteins interact with each other. The full-length protein, which is encoded by the At4g13350 gene, possess two NAP homologues of unknown functions, At1g08680 and At4g32630 (33% and 31% sequence identity, respectively), in the Arabidopsis genome. Other homologue is human Rip protein that interacts with the HIV Rev protein. To assess directly the significance of NAP-NSP interaction, we identified a mutant in the NAP gene and selected for homozygous Arabidopsis mutant line by PCR. The inactivation of this gene was confirmed by RT-PCR, confirming it is null allele. Wild type Col-0 plants and nap mutant lines were inoculated with CaLCuV DNA-A and DNA-B. Both Col-0 and nap lines developed typical symptoms of CaLCuV infection at similar intensity. Inactivation of the NAP gene does not seem to affect CaLCuV infection in Arabidopsis. These results indicate that either the NAP-NSP interaction is not required for NSP function or the NAP homologs are functionally analogs that are capable to replace the NAP role in the null allele mutant. Over expressing NAP plants were also inoculated with the virus CaLCuV, and presented a discrete increase in plant susceptibility, showing more severe symptoms and higher percentage of infected plants compared with wild type.
Palavras-chave: Nucleoporina
Proteína NSP
Geminivírus
Nucleoporin
NSP protein
Geminivirus
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
Idioma: por
País: BR
Editor: Universidade Federal de Viçosa
Sigla da Instituição: UFV
Departamento: Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal
Programa: Mestrado em Bioquímica Agrícola
Citação: FONTENELLE, Mariana Rodrigues. Functional characterization of a putative nucleoporin-like protein interacting with the geminivirus protein NSP. 2006. 79 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2006.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2399
Data do documento: 22-Fev-2006
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