Helmintos parasitos gastrintestinais de Gallus gallus domesticus Linnaeus, 1758 criados em sistema extensivo – identificação morfológica, molecular e controle biológico

Abstract

Os sistemas extensivos têm conquistado maior visibilidade com produtos diferenciados no mercado, devido à maior demanda do consumidor por produtos que aliem sustentabilidade e bem-estar animal. Todavia, tais criações expõem os animais a helmintos, aumentando o desafio e afetando a resposta imunológica das aves, causando óbitos nos animais e prejuízo econômico aos produtores. Os objetivos deste estudo são avaliar a ocorrência de helmintos parasitos gastrintestinais em aves criadas em sistemas extensivo no município de Viçosa, Minas Gerais, Brasil; verificar o potencial ovicida do fungo helmintófago Pochonia chlamydosporia como controlador biológico de nematódeos e por fim; identificar sequências moleculares e caracterizar a posição filogenética do trematódeo Postharmostomum commutatum. Cento e noventa e um intestinos delgado e grosso e 38 proventrículos aves abatidas por produtores da microrregião de Viçosa, foram doados ao trabalho. Os helmintos encontrados foram separados e identificados seguindo chaves taxonômicas. De 160 aves positivas (83,8%), 118 apresentavam infecção por mais de um helminto. Um total de 6031 helmintos foram classificados em 13 espécies distintas, sendo 469 exemplares do nematódeo Tetrameres sp. encontrados parasitando os proventrículos. Os percentuais encontrados foram divididos entre nematódeos (73,3%), cestódeos (45,5%), e trematódeos (3,66%). Comparando os grupos de helmintos recuperados nos intestinos delgado e grosso, observou-se maior ocorrência (62,3%) e maior média de helmintos recuperados do nematódeo Heterakis gallinarum (22,7 helmintos/ave). Dentre os cestódeos, a espécie de maior ocorrência foi Raillietina echinobothrida (37,7%) e dentre os trematódeos, P. commutatum obteve maior percentual (3,1%). Afim de testar a resistência à passagem pelo trato gastrintestinal e capacidade ovicida de P. chlamydosporia sobre ovos de nematódeos, comparou-se o percentual de interação entre o isolado mantido em laboratório e recuperado após passagem pelo trato gastrintestinal de G. domesticus com ovos de Ascaridia galli e H. gallinarum. Para tanto, foram utilizadas 22 aves criadas em sistema extensivo e separadas em dois grupos (controle e tratado), sendo fornecida dose única do isolado fúngico crescido em substrato de milho triturado, com total de 3,3 x 10 6 clamidósporos para o grupo tratado. Após a visualização de estruturas fúngicas compatíveis com P. chlamydosporia, foram feitos novos repiques para outras placas de Petri contendo ágar-água 2% (5 placas por horário). Sendo mantidas condições idênticas para ambos os grupos, as placas foram incubadas por 10 dias a 25oC no escuro e após este período, 200 ovos de cada nematódeo foram transferidos para cada placa. O percentual de interação foi avaliado por meio de leituras ao microscópio de luz realizadas a cada 24 horas, por um período total de 144h. Nos tempos de interação 24 e 72h, P. chlamydosporia mantido em laboratório demonstrou percentual de interação igual a 35,0 e 81,1%, respectivamente, sobre ovos de A. galli e, 25,5 e 83,8% em 24 e 72h sobre ovos de H. gallinarum. Após passagem pelo trato gastrintestinal das aves, o isolado apresentou nas primeiras 24h, 6,4% de interação com ovos de A. galli e 2,0% com ovos de H. gallinarum. Em 72h de interação, apresentou 34,3% de interação com ovos de A. galli e 18,8% com ovos de H. gallinarum. Os maiores percentuais de interação foram observados no tempo de 144h de interação entre fungo-ovos em ambos os helmintos testados. Posteriormente, caracterizou-se o processo de interação entre o fungo e os ovos de A. galli, H. gallinarum e Tetrameres sp. por microscopia eletrônica de varredura. Por fim, devido ao ciclo biológico complexo e importância médica veterinária potencial, as sequências moleculares dos genes 28S, ITS-2 e cox-1 do trematódeo P. commutatum foram avaliadas, afim de obter informações sobre a taxonomia deste parasito, uma vez que foram encontrados 50 espécimes adultos parasitando o cecos das aves doadas a este estudo (3,1%).Levantamentos parasitológicos devem ser específicos para cada região e este é o primeiro estudo que estima a fauna helmíntica gastrintestinal de G. domesticus criado em sistema extensivo no município de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. O fungo helmintófago P. chlamydosporia demonstrou possibilidade de uso como controlador biológico, uma vez que é capaz de diminuir a contaminação ambiental, interagindo com ovos de nematódeos parasitos gastrintestinais de aves. A espécie P. commutatum (considerada sinônimo de P. gallinum Witenberg, 1923) forma uma linhagem isolada de outros membros da superfamília Brachylaimoidea, quando comparadas as sequências moleculares das espécies, suportando o status distinto do gênero. Espera-se que os resultados obtidos neste estudo contribuam para inquéritos epidemiológicos de parasitos de aves domésticas na região possam favorecer medidas profiláticas e de controle desses parasitos.

Extensive systems have gained greater visibility with differentiated products in the market, due to the greater consumer demand for products that combine sustainability and animal welfare. However, such creations expose the animals to helminths, increasing the challenge and affecting the immune response of the birds, causing deaths in the animals and economic damage to the producers. The objectives of this study are to evaluate the occurrence of gastrointestinal helminth parasites in birds raised in extensive systems in the city of Vicosa, Minas Gerais, Brazil; to verify the ovicidal potential of the helmintophagous fungus Pochonia chlamydosporia as biological control of nematodes and finally; to identify molecular sequences and characterize the phylogenetic position of the trematode Postharmostomum commutatum. One hundred and ninety-one small and large intestines and 38 proventricules of birds slaughtered by producers of the micro- region of Vicosa, were donated to work. The helminths were separated and identified following taxonomic keys. Of 160 positive birds (83.8%), 118 had infection with more than one helminth. A total of 6031 helminths were classified in 13 distinct species, being 469 specimens of the nematode Tetrameres sp. found parasitizing the proventricles. The percentages found were divided among nematodes (73.3%), cestodes (45.5%), and trematodes (3.66%). Comparing the groups of helminths recovered in the small and large intestines, we observed a higher occurrence (62.3%) and a higher average of helminths recovered from the nematode Heterakis gallinarum (22.7 helminths / bird). Among the cestodes, the species with the highest occurrence was Raillietina echinobothrida (37.7%) and among the trematodes, P. commutatum obtained a higher percentage (3.1%). In order to test the resistance to passage through the gastrointestinal tract and ovicidal capacity of P. chlamydosporia on eggs of nematodes, the percentage of interaction between the isolate kept in the laboratory and recovered after passage through the gastrointestinal tract of G. domesticus with eggs of Ascaridia galli and H. gallinarum. For this, 22 birds were raised in an extensive system and separated into two groups (control and treated). A single dose of the fungal isolate grown on crushed corn substrate was used, with a total of 3.3 x 10 6 chlamydospores for the treated group. After visualization of fungal structures compatible with P. chlamydosporia, new repiques were made for other petri dishes containing 2% water-agar (5 plates per hour). With identical conditions being maintained for both groups, the plates were incubated for 10 days at 25 ° C in the dark and after this period, 200 eggs from each nematode were transferred to each plate. The percentage of interaction was evaluated by means of light microscope readings performed every 24 hours, for a total period of 144h. At the interaction times 24 and 72h, P. chlamydosporia kept in the laboratory showed a percentage of interaction equal to 35.0 and 81.1%, respectively, on A. galli eggs and, 25.5 and 83.8% in 24 and 72 hours on H. gallinarum eggs. After passage through the gastrointestinal tract of the birds, the isolate presented in the first 24h, 6.4% interaction with A. galli eggs and 2.0% with H. gallinarum eggs. In 72h of interaction, it presented 34.3% interaction with A. galli eggs and 18.8% with H. gallinarum eggs. The highest percentages of interaction were observed in the 144h time of interaction between fungus-eggs in both helminths tested. Subsequently, the interaction process between the fungus and the eggs of A. galli, H. gallinarum and Tetrameres sp. by scanning electron microscopy. Finally, due to the complex biological cycle and potential veterinary medical importance, the molecular sequences of the 28S, ITS-2 and cox-1 genes of the trematode P. commutatum were evaluated in order to obtain information on the taxonomy of this parasite, since they were found 50 adult specimens parasitizing the ceca of birds donated to this study (3.1%). Parasitological surveys should be specific for each region and this is the first study to estimate the gastrointestinal helminth fauna of G. domesticus created in an extensive system in the municipality of Vicosa, Minas Gerais, Brazil. The helminthophagous fungus P. chlamydosporia showed the possibility of using it as a biological controller, since it is able to reduce environmental contamination by interacting with nematode eggs of gastrointestinal parasites of birds. The species P. commutatum (considered synonymous with P. gallinum Witenberg, 1923) forms an isolated lineage of other members of the superfamily Brachylaimoidea, when comparing the molecular sequences of the species, supporting the distinct status of the genus. It is hoped that the results obtained in this study contribute to epidemiological surveys of poultry parasites in the region that may favor prophylactic and control measures of these parasites.