Bacterial adherence to different inert surfaces evaluated by epifluorescence microscopy and plate count method

Abstract

The adherence of Listeria inoccua L6a and Staphylococcus aureus ATCC6538 was evaluated on stainless steel (SS), polycarbonate (PC) and polypropylene (PP) chips. The EP results showed a significant difference (p<0.05) among the microorganism species interactions, the surfaces and the contact time. The number of adhered cells on the chip surfaces increased as contact time increased and the number of L. innocua or S. aureus on the surface of SS, PC and PP chips reached 1.0x105 CFU/cm2 after 12 h of contact, in both methods. The CP method showed a better sensitivity to detect low number of adhered cells. The EP was better when the average number of adhered cells was between 10 and 100 per microscopy field.

A adesão de Listeria innocua L6a e de Staphylococcus aureus ATCC 6538 foi avaliada em cupons de prova de aço inoxidável AISI 304, de policarbonato, ambos com dimensões de 10x10x1mm, e de polipropileno com dimensões de 10x10x4mm. Os cupons limpos e esterilizados foram imersos em 100mL de caldo TSB ou de BHI, contendo cerca de 1,0x103 UFC/ml de L. innocua ou de S. aureus, respectivamente, e incubados a 30ºC. Após 0,2,4,6,8,10 e 12horas, os cupons foram retirados e imersos em tampão fosfato (0,31M e pH=7,2), durante 1 minuto, para remoção de células planctônicas; em seguida, submetidos à determinação do número de células aderidas pelas técnicas da microscopia de epifluorescência (MEP) e da contagem-padrão em placas após vórtex (CPP). Para MEP, os cupons foram imersos em solução de Kirkpatrick durante 3 minutos para fixar as células às superfícies. Posteriormente, as células foram coradas com alaranjado de acridina durante 5 minutos, e enumeradas pela MEP, em objetiva de imersão com área de 0,0226mm2. Para CPP, os cupons foram imersos em 2mL de tampão fosfato, submetidos ao vórtex, durante 1 minuto, para remoção das células sésseis, e, em seguida, foram efetuadas as contagens, usando-se ágar BHI ou TSB e incubação a 30ºC por 48horas. Os resultados, tanto para MEP quanto para CPP, foram expressos em UFC/cm2. Para a técnica de MEP, constatou-se diferença significativa (p<0,05) quando se avaliaram as interações entre os microrganismos, as superfícies e os tempos de contato. Verificou-se que o número de células aderidas aumentou com o tempo de contato, para todas as superfícies, independente do microorganismo. A CPP mostrou-se mais sensível para detectar números baixos de células aderidas às superfícies. No entanto, de forma geral, as contagens bacterianas obtidas pela CPP eram menores do que aquelas obtidas pela MEP. Pode-se afirmar que a MEP foi a técnica mais adequada para quantificar a adesão bacteriana, principalmente, quando o número de células aderidas às superfícies, observadas nos campos microscópicos, encontrava-se entre 10 e 100.