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dc.contributor.authorFausto, Mariana Costa
dc.date.accessioned2015-03-26T13:46:51Z
dc.date.available2012-12-11
dc.date.available2015-03-26T13:46:51Z
dc.date.issued2010-05-07
dc.identifier.citationMariana Costa Fausto. Padronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para sorologia, detecção e quantificação do circovírus suíno 2. 2010. 74 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2010.por
dc.identifier.urihttp://locus.ufv.br/handle/123456789/5028
dc.description.abstractO Circovírus suíno 2 (PCV-2) é o principal agente causador da Síndrome Multissistêmica do Definhamento dos Suínos (SMDS), e está associado a diferentes síndromes que acometem esses animais. O termo PCVAD (Porcine circovírus 2 associated diseases) foi introduzido em 2006, para enquadrar todas essas doenças. Uma vez que estudos sorológicos são fundamentais para o monitoramento do vírus, o objetivo desse trabalho foi desenvolver ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para a detecção e titulação de anticorpos anti-PCV-2 e também para a quantificação viral, assim como da proteína recombinante do capsídeo do PCV-2 (rCap PCV-2) em extratos de Escherichia coli . Após a padronização da técnica, 29 amostras de soro negativos por ELISA indireto foram utilizadas para a determinação do cutt off. O ELISA qualitativo foi comparado com a Imunoperoxidase em Monocamada (IPMA), através da análise de 155 amostras de soro, pré-determinadas por IPMA, sendo 125 amostras positivas e 30 amostras negativas para anticorpos anti-PCV-2, no ELISA. Os testes apresentaram uma concordância de 98,70 % confirmando assim a alta sensibilidade e especificidade do ELISA relativa ao IPMA. No ensaio quantitativo, 20 amostras de soro tiveram o título determinado através do ELISA e este apresentou um maior limite de detecção de anticorpos do que o IPMA, em 18 das 20 amostras avaliadas. Para a quantificação da rCap PCV-2 presente em extratos de E.coli, um ELISA de captura foi desenvolvido. Foram utilizadas IgGs precipitadas a partir de soro policlonal de coelho anti-rCap PCV-2 como anticorpo de captura e as IgGs conjugadas com peroxidase como anticorpo de detecção. Uma curva-padrão foi obtida através da diluição seriada da rCap PCV-2 e o ensaio apresentou um limite de detecção na faixa entre 0,625 a 0,0097 μg/mL, que foi utilizado com sucesso para quantificar a proteína no extrato de E.coli. Assim espera-se que este teste seja também aplicado futuramente na quantificação do PCV-2 em amostras de campo.pt_BR
dc.description.abstractPorcine circovirus 2 (PCV-2) is the major causative agent of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) and is associated with different syndromes that affect the swine. The term PCVAD (Porcine circovirus associated diseases) was introduced in 2006 to gather many diseases. Since serological studies are essential for monitoring the virus, the aim of this study was to develop enzyme immunoassays (ELISA) for detection and titration of antibodies to PCV-2 and also for viral quantification as well as the recombinant protein capsid PCV-2 (rCAP PCV-2) in extracts of Escherichia coli. After the standardization of the technique, 29 negative serum samples in ELISA were used for determining the cutt off. The quantitative ELISA was compared with the Immunoperoxidase monolayer (IPMA), through analysis of 155 serum samples, pre-determined by IPMA, of which 125 samples were positive and 30 negative samples for antibodies to PCV-2, in ELISA. The tests showed a concordance of 98.70% confirming the high sensitivity and specificity of ELISA on the IPMA. In the quantitative assay, 20 serum samples had the title determined by ELISA and it showed a higher detection limit of antibodies than the IPMA in 18 of the 20 samples tested. To quantify the rCAP PCV-2 in extracts of E.coli, a capture ELISA was developed. Were used precipitated IgGs from polyclonal rabbit serum anti-rCap PCV-2 as capture antibody and the conjugated IgGs with peroxidases as detection antibody. A standard curve was obtained by serial dilution of rCap PCV-2 and the test showed a detection limit in the range of 0.625 to 0.0097 mg/mL, which was successfully used to quantify the protein in the extract of E.coli. Thus it is expected that this test is also applied in the quantification of future PCV-2 in field samples.eng
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
dc.formatapplication/pdfpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Viçosapor
dc.rightsAcesso Embargadopor
dc.subjectCircovírus suíno 2por
dc.subjectELISApor
dc.subjectCurva-padrãopor
dc.subjectPorcine circovirus type 2eng
dc.subjectStandard curveeng
dc.titlePadronização de ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para sorologia, detecção e quantificação do circovírus suíno 2por
dc.title.alternativeStandardization of enzyme immunoassay (ELISA) for serology, detection and quantification of porcine circovirus type 2eng
dc.typeDissertaçãopor
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/0445774769399383por
dc.contributor.advisor-co1Oliveira, Leandro Licursi de
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/0578231392218162por
dc.contributor.advisor-co2Silva Júnior, Abelardo
dc.contributor.advisor-co2Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4771645P8por
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.departmentBiotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. depor
dc.publisher.programMestrado em Medicina Veterináriapor
dc.publisher.initialsUFVpor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::MEDICINA VETERINARIA PREVENTIVApor
dc.contributor.advisor1Lamêgo, Márcia Rogéria de Almeida
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782197P4por
dc.contributor.referee1Lobato, Zélia Inês Portela
dc.contributor.referee1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780824Z7por
dc.contributor.referee2Salcedo, Joaquín Hernán Patarroyo
dc.contributor.referee2Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783313T4por
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