Axônios contendo neuropeptídeo Y em proximidade à neurônios contendo kisspeptina no hipotálamo de ovelhas

Abstract

O eixo reprodutivo tem a capacidade de responder a variações nos fatores metabólicos. Entretanto, os mecanismos celulares e moleculares que ligam o balanço energético com reprodução, assim como os locais do cérebro para esta função, permanecem não compreendidos. Peptídeos neuroendócrinos, como neuropeptídeo Y (NPY) e kisspeptina são considerados como tendo função primordial na sinalização da nutrição à reprodução. O NPY é um peptídeo com potente efeito orexigênico e a kisspeptina é o mais poderoso estimulador da liberação de hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH)/hormônio luteinizante (LH). Para avaliar um possível papel do NPY na modulação da resposta de kisspeptina, é necessário estabelecer as bases anatômicas entre os neurônios contendo esses dois neuropeptídeos no hipotálamo. O modelo experimental utilizado foram ovelhas mestiças Suffolk ovariectomizadas e estimuladas por implante de estradiol. Os animais foram abatidos e cortes do hipotálamo contendo a área pré-óptica (POA) e núcleo arqueado (ARC) foram submetidas a imunofluorescência dupla para detecção de NPY e kisspeptina. Por meio de microscopia de fluorescência, foi analisado: o número de corpos celulares contendo kisspeptina- imunoreativa (kp10-ir); o número de varicosidades contendo NPY-ir em contato próximo com corpo celular ou dendritos de kp10-ir e a densidade das fibras de NPY nas regiões estudadas. No total, foram analisadas 3.037 células imunorreativas para kisspeptina, sendo que 27,2% dessas estavam em contato próximo a axônios contendo NPY. O número médio de contatos de axônios de NPY com o corpo celular de kisspeptina foi de 1,6 ± 0,3 e 2,1 ± 0,3 na POA e ARC, respectivamente. O número de contatos de NPY com dendritos de kisspeptina foi 1,5 ± 0,5 e 1,6 ± 0,1 na POA e ARC, respectivamente. Assim, foi verificado que axônios contendo NPY estão em contato próximo com corpos celulares e dendritos de uma subpopulação de neurônios secretores de kisspeptina na POA e ARC de ovelhas. As análises indicam que o NPY possa regular funções neuroendócrinas, atuando diretamente em neurônios kisspeptina.

The reproductive axis responds to changing on levels of metabolic factors. However, cellular and molecular mechanisms linking energy balance and reproduction, as well the brain sites for this function remain not well understood. Neuroendocrine peptides like neuropeptide Y (NPY) and kisspeptin are considered to have a major function signaling nutrition to reproduction. NPY is a peptide with a potent orexigenic effect and kisspeptin is the most important stimulator of the releasing of the gonadotrophin-releasing hormone (GnRH)/luteinizing hormone (LH). To evaluate the role of NPY on the modulation of the kisspeptin releasing is necessary to establish the anatomic bases between this two neuropeptides in the hypothalamus. The experimental model used was ovariectomized crossbreed Suffolk ewes with subcutaneous estradiol implant. Animals were euthanatized and hypothalamic tissue assayed to double-label immunofluorescence to detect NPY and kisspeptin in pre-optic area (POA) and arcuate nucleus (ARC). Fluorescence microscopy was used to analyze the number of immunoreactive kisspeptin containing cell bodies (kp-ir), NPY-ir containing varicosities in close contact with kp10-ir cell bodies and dendrites, density of NPY containing fibers in the studied sites. Total of 3,037 kp10-ir cell bodies were analyzed, which 27% of them are in close contact with NPY containing axons. The mean number of axo-somatic contacts per kp10-ir neuron observed was 1.6 ± 0.3 and 2.1 ± 0.3 for POA and ARC, respectively. On the other hand, the mean number of NPY varicosities in close contact with kp10-ir dendrite was 1.5 ± 0.5 and 1.6 ± 0.1 contacts for POA and ARC, respectively. Thus, this study determined that NPY containing axons are in close contact with kisspeptin cell bodies and dendrites in POA and ARC of ovariectomized ewes with estradiol implant. It suggests that NPY may regulate neuroendocrine functions acting directly on kisspeptin neurons.