Análise citogenética comparativa de três subfamílias de hilídeos (Amphibia: Anura) do Estado de Minas Gerais

Abstract

Estudos citogenéticos com os gêneros Aplastodiscus, Boana, Bokermannohyla, Ololygon, Scinax e Dendropsophus envolvem a descrição de cariótipo explorando técnicas clássicas, como coloração convencional, banda-C, bandamento com fluorocromos (DAPI/CMA 3 ), NOR e técnicas moleculares, como o FISH com sondas teloméricas, sondas espécificas, de rDNA 18S e poucos utilizando microssatélites. O objetivo desse estudo é a descrição do cariótipo de oito espécies ainda não cariotipadas, sendo essas: Aplastodiscus cavicola, A. weygoldti, Aplastodiscus sp. 4, Aplastodiscus sp. 6, Bokermannohyla ibitipoca, Ololygon luizotavioi, Dendropsophus bipunctatus e D. ruschii, identificação de NORs e o mapeamento físico dos microssatélites CA (15) e CAT (10) , afim de inferir sobre a evolução cromossômica nas subfamílias Cophomantinae, Scinaxinae e Dendropsophinae. O número diploide 2n= 18 cromossomos, assim como a marcação da NORs no par cromossômico 9, foi encontrado para Aplastodiscus cavicola, Aplastodiscus sp. 4 sendo que ambas tiveram fómulas cariotípicas 6m+12sm, ao passo que Aplastodiscus sp. 6 4m+10sm+2st, em oposição A. weygoldti mostrou 2n= 22 cromossomos classificados em 14m+6sm+2st e a NOR evidenciada no par de cromossomos 6. Enquanto, as espécies Bokermannohyla ibitipoca e Ololygon luizotavioi apresentaram 2n= 24 cromossomos, sendos suas fórmulas cariotípicas e marcações de NORs: 20m+2sm+2st/ NOR: par cromossômico 12 e 8m+12sm+4st/ NOR: par cromossômico 9, respectivamente. Enquanto as espécies com 2n= 30 cromossomos, Dendropsophus bipunctatus e D. ruschii tiveram 12m+12sm+4st+2t e 10m+10sm+6st+4t, nessa ordem e NORs no par de homólogos 13. Os microssatélites CA (15) e CAT (10) marcaram em blocos nas regiões centroméricas, pericentroméricas e terminais dos cromossomos em todas as espécies analisadas, sendo tais marcações pontuais nos cariótipos de algumas espécies, e em outras as marcações apresentaram-se dispersas ao longo dos cromossomos. Esses resultados demonstraram que esses microssatélites são marcadores para algumas espécies, como por exemplo, em D. elegans, O. carnevalli e Boa. pardalis, o que propiciou o entendimento de possíveis rearranjos cromossômicos. A inclusão de novos cariótipos em Aplastodiscus permitiu uma melhor caracterização dos números diploides e a visualização de um novo evento de fissão cromossômica no gênero de 2n= 18 para 2n=22 cromossomos. Desse modo, nosso estudo ampliou o conhecimento sobre a evolução cromossômica em Hylidae, compreendendo melhor as particularidades cariotípicas de cada espécie analisada devido a utilização de mais ferramentas citogenéticas.

Cytogenetic studies with the genera Aplastodiscus, Boana, Bokermannohyla, Ololygon, Scinax and Dendropsophus involve the description of karyotype exploring classical techniques such as conventional staining, C-band, fluorochrome banding (DAPI / CMA 3 ), NOR and molecular techniques such as FISH with telomeric probes, 18S rDNA probes, and a few using microsatellites. The objective of this study is to describe the karyotype of eight species not yet karyotyped, such as: Aplastodiscus cavicola, A. weygoldti, Aplastodiscus sp. 4, Aplastodiscus sp. 6, Bokermannohyla ibitipoca, Ololygon luizotavioi, Dendropsophus bipunctatus and D. ruschii, identification of NORs and physical mapping of the microsatellites CA (15) and CAT (10) , in order to infer chromosome evolution in the subfamilies Cophomantinae, Scinaxinae and Dendropsophinae. The diploid number 2n= 18 chromosomes, as well as the NORs marking on the chromosomal pair 9, was found for Aplastodiscus cavicola, Aplastodiscus sp. 4 being both had karyotypic formula 6m+12sm, whereas Aplastodiscus sp. 6 had karyotypic formula 4m+10sm+2st. In opposition, A. weygoldti showed 2n= 22 chromosomes classified in 14m+6sm+2st and the NOR showed in the pair of chromosomes 6. Meanwhile, the species Bokermannohyla ibitipoca and Ololygon luizotavioi presented 2n= 24 chromosomes, its karyotype formulas and NORs markers: 20m+2sm+2st/NOR: chromosomal pair 12 and 8m+12sm+4st/NOR: chromosomal pair 9, respectively. While species with 2n= 30 chromosomes, Dendropsophus bipunctatus and D. ruschii had 12m+12sm+4st+2t and 10m+10sm+6st+4t, in that order and NORs in the pair of homologues 13. The microsatellites CA (15) and CAT (10) marked in blocks in the centromeric, pericentromeric and terminal regions of the chromosomes in all species analyzed, being such punctual markings in the karyotypes of some species, and in others the markings were scattered along the chromosomes. These results demonstrated that these microsatellites are markers for some species, as for example, in D. elegans, O. carnevalli and Boa. pardalis, which allowed the understanding of possible chromosomal rearrangements. The inclusion of new karyotypes in Aplastodiscus allowed a better characterization of the diploid numbers and the visualization of a new event of chromosome fission in the genus of 2n= 18 for 2n= 22 chromosomes. Thus, our study increased the knowledge about chromosome evolution in Hylidae, better understanding the karyotypic peculiarities of each species analyzed due to the use of more cytogenetic tools.