Avaliação andrológica e criopreservação de sêmen de pumas (Puma concolor Linnaeus, 1771) adultos

Abstract

Os felinos silvestres estão entre as espécies mais ameaçadas do mundo, e sua população é afetada por fatores que variam geograficamente, seja a descaracterização de habitats, disponibilidade de alimentos, forte pressão de caça ou baixa densidade populacional. Tecnologias de reprodução assistida, como a criopreservação de gametas e a fertilização in vitro, são ferramentas fundamentais para a conservação das espécies, uma vez que auxiliam na manutenção de uma população geneticamente viável e permitem translocação de material genético sem a necessidade do transporte dos animais. O presente estudo objetivou coletar sêmen de pumas (Puma concolor) assim como descrever as características físicas e morfológicas do sêmen e também avaliar a congelabilidade do sêmen desta espécie empregando dois meios de congelamento a base de TRIS-citrato e gema de ovo, sendo um com 5% de glicerol e outro com 7,5%. Foram utilizados cinco pumas adultos mantidos em condições de cativeiro no Centro de Reabilitação de Animais Silvestres do estado do Mato Grosso do Sul Brasil (CRAS-MS). Os animais foram anestesiados com associação de cloridrato de quetamina e cloridrato de xilazina nas doses de 10 mg/kg e 1,2 mg/kg, respectivamente. |Posteriormente foi realizada a coleta, por meio da eletroejaculação, que consistiu na aplicação de um máximo de 4 séries de 10 estímulos elétricos de 16V. Após a sedação, procedeu-se a coleta de urina e lavagem da bexiga com solução fisiológica estéril. O sêmen coletado foi analisado quanto ao aspecto físico (cor e odor), volume, concentração e morfologia espermática, além do vigor e da motilidade, que foram utilizados para o cálculo do índice espermático. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL, resfriado sob uma taxa de 0,55ºC/min por duas horas (uma hora de resfriamento e mais uma hora de equilíbrio) e por fim congelado a uma taxa de 5,8ºC/min. As amostras de sêmen foram descongeladas em banho maria a 37ºC por 30 segundos e avaliadas quanto ao vigor e à motilidade espermática, além dos teste de termorresistência e hiposmótico. O protocolo proposto para coleta de sêmen de puma mantidos em cativeiro mostrou-se eficiente, com a obtenção de amostras livres de contaminação com urina e com uma média total de espermatozóides por ejaculado superior à descrita na literatura para esta espécie. O índice espermático observado nas amostras frescas também foi superior ao descrito na literatura. A média de patologias totais observada foi de 53,88% e apesar da elevada taxa de espermatozóides patológicos, apenas um indivíduo dentre os pumas avaliados mostrou-se teratospérmico. As patologias mais frequentemente observadas foram cauda fortemente dobrada ou enrolada, cauda dobrada ou enrolada e cauda enrolada na cabeça. O protocolo de congelamento e descongelamento empregado mostrou-se satisfatório na criopreservação de sêmen de puma. O índice espermático declinou somente após 40 minutos de incubação a 38ºC em ambos os meios testados (16,25% no meio com 5% de glicerol e 11,25% no meio com 7,5%) e em média de 25 a 29% dos espermatozóides apresentaram integridade na membrana plasmática. Não foram observadas diferenças (p>0,05) entre os parâmetros avaliados após a criopreservação, utilizando as diferentes concentrações de glicerol no meio TRIS- gema de ovo.

The wild felines is one of the most endangered species of the world and its population is affected by some factors that vary geographically because of the alduteration of their habitat, food available, strong hunt pressure or even the low population density. Assisted reproduction techniques such as gamete s cryopreservation and in vitro fertilization are fundamental for the conservation as they contributes to restoring genetic vigor and makes possible to transfer genetics sources without moving the animals itself. The aim of this study is collect semen from cougar (Puma concolor), describe its physics and morphologics characteristics and also evaluate its frozen capacity using two extenders with TRIS- citrate and egg yolk were evaluated, one with 5% of glycerol and the other with 7.5%. Five captive adult cougars from Mato Grosso do Sul s Rehabilitation Center Brazil (CRAS-MS) were used. The anesthetic protocol was an association of ketamine (10 mg/kg) and xilazine (1.2 mg/kg). Semen collection was done through electroejaculation method with a maximum of four series of 10 stimuli with 16 Volts. Before with collection the urine was collected and the bladder was washed with sterile physiologic solution. The semen samples were evaluated using the following parameters: physics aspects (color and smell), volume, concentration, morphology, sperm progressive status, sperm motility. The last two parameters were used to calculate the sperm motility index. The semen samples were packed in 0.25 ml straws, cooled at a rate 0.55ºC/min during two hours (one for de cooling and one in equilibrium) and finely frozen at a rate 5.8ºC/min. The thawing was carried through immersion in water at 37ºC during 30 seconds. The post thawed samples were evaluated using the sperm progressive status, sperm motility, sperm longevity (thermorresistance test) and hiposmotic swelling tests. The protocol used in this study for captive cougar s semen collection were efficient, with the acquisition of samples free from urine and a medium of total spermatozoids per ejaculate higher than those describe in literature for this species. The sperm motility index was also higher than those describe in literature. The medium of structurally abnormal spermatozoa were 53.88% and besides the high pleiomorphic rate only one animal between those evaluated at this study was considered teratospermic. The most frequent pathologies were tightly coiled or bent tail, coiled or bent tail and tail coiled on the head. The cryopreservation and thawing protocol were good for the cryopreservation of cougar s semen. The sperm motility index reduced only after 40 minutes of incubation at 38ºC for both extenders tested (16.25% in the extender with 5% of glycerol and 11.25% in the extender with 7.5%) and a medium of 25 to 29% of the spermatozoids showed plasmatic membrane integrity. There was no difference (p>0.05) between the two concentrations of glycerol used, according to the parameters evaluated.