Expressão transitória do gene gus em maracujazeiro (Passiflora giberti N.E. Brown) mediada pelo bombardeamento de partículas

Abstract

O presente trabalho teve como objetivo avaliar a transformação transitória pela expressão do gene da B-glucuronidase (gus ), presente em ambos os plasmídios utilizados, a saber: pEA18 e pJMD67. Agregados globulares embriogênicos de Passiflora giberti N.E. Brown, provenientes do cultivo em meio líquido rico em aminoácidos (AA2), contendo 2,0mg l-1 de 2,4 D, foram utilizados como fontes de explantes no bombardeamento. Os tecidos foram bombardeados com partículas de ouro e de tungstênio, recobertas com DNA plasmidial. A avaliação da atividade para GUS foi baseada na reação histoquímica in situ, sendo quantificado o número de unidades de expressão. Foi observado que a elevada atividade fisiológica das células embriogênicas foi importante na obtenção da expressão do gene da B-glucuronidase. Foram observados níveis de expressão superiores a 45% em relação ao total de explantes "submetidos ao bombardeamento. A expressão do gene gus foi superior em calos bombardeados por microprojéteis constituídos de partículas de ouro,comparativamente às partículas de tungstênio; todavia, foram obtidos níveis de expressão semelhantes em calos bombardeados com os plasmídios pEA18 e pJMD67

The aim of this work was to evaluate some critical parameters for the transient gus gene expression system in Passiflora giberti using a home-made electrical-discharge gun device. Cell suspension-derived globular embryogenic aggregates, cultured on a liquid aminoacid rich medium AA2, containing 2.0 mg l-1 2,4-D, were used as explant sources for particle bombardment. Tissues were bombarded with tungsten M 10 and gold particles coated with plasmid DNA. Both plasmids used for these experiments contained the B-glucuronidase (gus ) structural sequence, under control of the 358 CaMV promoter, for pEA18, and the chlorophyll binding site (CabbS) 35S promoter, for. pJMD67. Tissues were analysed for in situ localization of GUS activity and the transformation efficiency was expressed as the number of blue spots per embryogenic callus (expression units). GUS activity was detected 6 to 12 hr after bombardment. Over 45% of the explants bombarded expressed transient GUS activity. For the microprojectile type, DNA-coated gold particles with the plasmid pJMD67 showed higher levels of GUS expression as compared to tungsten particles. Using DNA-coated gold particles, there was no significant effect of the plasmids, pEA18 and pJMD67, on the level of the reporter gene expression. This represents the first report on the literature on transformation of the genus using particle acceleration.