NTPDase-1 de Trypanosoma cruzi: imunolocalização e estudo de seu papel nas etapas iniciais da infecção celular por formas epimastigotas

Abstract

A doença de Chagas, também conhecida como a tripanossomíase americana, é uma enfermidade tropical causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, sendo encontrada principalmente na América Latina e acometendo atualmente cerca de 10 milhões de pessoas no mundo. Esta doença é transmitida aos seres humanos e a mais de 150 espécies de mamíferos domésticos e selvagens pelas fezes de triatomíneos infectados durante o repasto sanguíneo. A NTPDase-1 é uma ectonucleotidase caracterizada na cepa Y do T. cruzi como uma proteína presente na superfície do parasito, sendo um importante fator de virulência, infectividade e considerada um bom alvo para bloqueio da infecção. Esta enzima catalisa a hidrólise de nucleotídeos de adenosina tri e di-fosfatados, sendo provavelmente capaz de modular a sinalização purinérgica em mamíferos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel da NTPDase-1 na adesão celular do parasito em célula de mamífero através de ensaios de bloqueio com anticorpo específico e competição com a proteína recombinante, além de verificar a localização da NTPDase-1 em epimastigotas por microscopia de fluorescência confocal e microscopia eletrônica. Os resultados indicam uma redução significativa na taxa de adesão de epimastigotas em células VERO, alcançando até 85% de inibição nos ensaios de competição com a proteína NTPDase 1 recombinante e até 61% de inibição na presença de anticorpos anti- NTPDase 1 purificado, comparados ao controle composto somente de células VERO e epimastigotas de T. cruzi. As imagens obtidas por microscopia confocal e imunoeletrônica revelam a expressão da proteína na superfície do parasito e próxima a base do flagelo. A descoberta de moléculas envolvidas com o processo de infecção presentes nas interações parasitohospedeiro e o conhecimento da função destas biomoléculas pode ser um bom alvo para a quimioterapia.

Chagas disease, also known as American trypanosomiasis, is a tropical disease caused by the protozoan Trypanosoma cruzi that is found mainly in Latin America and currently affects roughly 10 million people worldwide. This disease is transmitted to humans and over 150 species of domestic and wild mammals through the feces of triatomas infected while feeding on blood. NTPDase1 is an ectonucleotidase characterized in the Y strain of T. cruzi as a protein present on the surface of the parasite, is an important factor in virulence and infectivity and is considered a good candidate for blocking the infection. This enzyme catalyzes the hydrolysis of adinosine tri- and diphosphates and is probably capable of modulating purinergic signaling in mammals. The objective of this work was to evaluate the role of NTPDase1 in cellular adhesion of the parasite on mammal cells through blockage assays with specific antibodies and competition with the recombinant protein, in addition to verification of the localization of the NTPDase1 in the epimastigotes using fluorescent confocal microscopy and electron microscopy. The results indicate a significant reduction in the epimastigote adhesion on Vero cells, reaching an inhibition rate of up to 85% in competition tests with the recombinant NTPDase1 protein and up to 61% inhibition rates in the presence of purified NTPDase1 antibodies, compared with the control group composed solely of Vero cells and T. cruzi epimastigotes. The images obtained using confocal and immunoelectron microscopy reveal the expression of the protein on the surface of the parasite and near the base of the flagellum. The discovery of the presence of molecules involved in the infection process in the parasite-host interactions and knowledge of the function of these biomolecules may lead to a good target for chemotherapy.