Efeitos da reinserção de dispositivo intravaginal de progesterona sobre parâmetros endócrinos e embrionários em ovelhas superovuladas

Abstract

Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia do uso de dispositivo de progesterona do quarto ao oitavo dia após a superovulação de ovelhas mestiças Dorper/Santa Inês sobre a função luteal e produção in vivo de embriões. Um total de 20 ovelhas multíparas receberam um dispositivo intravaginal de progesterona (P4; 0,36 g; Primer ® , Agener União Saúde Animal, Brasil) por nove dias, inserido (D0) e retirado (D9) no período da tarde (18:00 h), bem como seis doses decrescentes (25, 25, 15, 15, 10, 10%) de 133 mg de pFSH i.m. (Folltropin ® , Vetoquinol, Brasil) em intervalos de 12 h. Sendo a superovulação iniciada 60h antes da remoção do dispositivo e terminando concomitantemente com a remoção do dispositivo. Todas as ovelhas receberam 125 µg de cloprostenol i.m. (Sincrocio ® ; Ourofino, Brasil) na quinta e sexta doses de pFSH e 50 µg de gonadorelina i.m. (Gestran ® , Tecnopec, São Paulo, Brasil) no D10, e foram submetidas a monta natural a cada 12 h durante o estro. No D13, as ovelhas previamente detectadas em estro e com corpos lúteos viáveis (CL; n=19) foram igualmente alocadas para receber seus próprios implantes intravaginais usados alguns dias antes (G-P4; n=10) ou não (G-Control; n=9). No D17, os dispositivos foram novamente removidos e todas as fêmeas receberam o protocolo de relaxamento cervical incluindo 125 µg de cloprostenol i.m. e 0,5 mg de benzoato de estradiol i.m. (Gonadiol ® ; Zoetis, Brasil) ambos 16 h antes, bem como 50 UI de ocitocina i.v. (Ocitocina Forte ® , UCB, Brasil) 20 min antes da recuperação não cirúrgica de embriões. A contagem e a viabilidade do CL foram realizadas por ultrassonografia transretal modo B e Doppler colorido antes da reinserção do implante (D13) e na sua remoção (D17). Amostras de sangue foram em D9, D13 e D17 para a determinação das concentrações circulantes de progesterona (P4). Os dados não paramétricos e paramétricos foram analisados pelo teste de Mann- Whitney e ANOVA, respectivamente. As frequências foram avaliadas pelo teste Qui- quadrado ou exato de Fisher. As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. A resposta do estro foi de 95% (19/20). Todas as ovelhas em estro apresentaram pelo menos um CL viável no D13. As concentrações plasmáticas de P4 foram semelhantes (P>0,05) em D9 (1,0±0,2 vs. 1,9±0,7 ng/mL) e 13 (1,1±0,4 vs. 1,6±0,5 ng/mL), mas diferiu em D17 (4,0±1,3 vs. 9,2± 2.8) para G-Control e G-P4, respectivamente. A regressão do CL foi semelhante (P>0,05) nas ovelhas G-Control (44,4%) e G-P4 (33,3%). A taxa média de recuperação não diferiu entre os grupos (P>0,05) e os óvulos/embriões recuperados foram inferiores (P<0,05) no G-Controle (24,5 ± 10,6% e 3,7 ± 2,0) do que no G-P4 (52,7 ± 10,5% e 11,6 ± 2,9) ovelhas, respectivamente. A taxa de viabilidade embrionária foi semelhante (P>0,05) ao G- Control (9,1% ou 2/22) e G-P4 (23,5% ou 19/81). Em conjunto, esses dados sugerem que a reinserção do implante intravaginal de progesterona por quatro dias após a superovulação promove maior concentrações de P4 circulante, resultando em maior recuperação embrionária. Palavras-chave: Regressão Prematura de Corpo Lúteo. Superovulação. Colheita de embrião não cirúrgica.

This study aimed to assess the efficacy of using a progesterone device from fourth to eighth day after superovulation device on the luteal function and in vivo embryos production in crossbred Dorper/Santa Inês ewes. A total of 20 multiparous ewes received an intravaginal progesterone device (P4; 0.36 g; Primer ® , Agener União Saúde Animal, Brazil) for nine days, inserted (D0) and removed (D9) in the afternoon (18:00 h), as well as six decreasing doses (25, 25, 15, 15, 10, 10%) of 133 mg pFSH i.m. (Folltropin ® , Vetoquinol, Brazil) at 12 h intervals, starting 60 h before device removal and finishing concomitantly to device removal. All ewes received 125 µg cloprostenol i.m. (Sincrocio ® ; Ourofino, Brazil) at fifth and sixth FSH doses, and 50 µg gonadorelin i.m. (Gestran ® , Tecnopec, São Paulo, Brazil) on D10, and were subjected to natural mating every 12 h while in estrus. On D13, the ewes previously detected in estrus and with viable corpora lutea (CL; n=19) were equally allocated for receiving their own intravaginal implants used a few days before (G-P4; n=10) or not (G-Control; n=9). On D17, the devices were again removed, and all females received the cervical relaxation protocol including 125 µg cloprostenol i.m. and 0.5 mg estradiol benzoate i.m. (Gonadiol ® ; Zoetis, Brazil) both 16 h before, as well as 50 IU oxytocin i.v. (Ocitocina Forte, UCB, Brazil) 20 min before non-surgical embryo recovery (NSER). CL count and viability were performed by transrectal B-mode and color Doppler ultrasonography before implant re-insertion (D13) and at its removal (D17). Blood samples were done before implant removal or insertion on D9, D13, and D17 for plasma progesterone (P4) analyses. Non-parametric and parametric data were analyzed by Mann-Whitney test and ANOVA, respectively. Frequencies were assessed by Chi-square or Fisher exact test. Differences were considered as significant when p<0.05. The estrous response was 95% (19/20). All ewes in estrus showed at least one viable CL on D13. P4 was similar (P>0.05) on D9 (1.0±0.2 vs. 1.9±0.7 ng/mL) and 13 (1.1±0.4 vs. 1.6±0.5 ng/mL) but differed on D17 (4.0±1.3 vs. 9.2±2.8) for G-Control and G-P4, respectively. CL regression was similar (P>0.05) in G-Control (44.4%) and G-P4 (33.3%) ewes. The difference of average recovery rate was not significant (P>0.05) and ova/embryos recovered were inferior (P<0.05) in G- Control (24.5 ± 10.6% and 3.7 ± 2.0) than in G-P4 (52.7 ± 10.5% and 11.6 ± 2.9) ewes, respectively. The embryo viability rate was similar (P>0.05) to G-Control (9.1% or 2/22) and G-P4 (23.5% or 19/81). Altogether, these data suggest that the reinsertion of the intravaginal progesterone implant for four days after superovulation promotes greater P4, resulting in a greater ova/embryo recovered. Keywords: Corpus luteum. Estrous synchronization. NSER.