Desenvolvimento de método cromatográfico via CLAE-UV, para controle de qualidade do fitoterápico, tintura de Alecrim-Pimenta, produzido pelas Farmácias Vivas no Brasil

Abstract

O uso de fitoterápicos no Brasil vem sendo estimulado pelo Sistema Único de Saúde (SUS), através das Farmácias Vivas que produzem e distribuem estes medicamentos para população em geral. Os fitoterápicos são amplamente reconhecidos pelo seu uso tradicional, porém há poucas metodologias na literatura que garantem o seu controle de qualidade. Desta forma, com o avanço das técnicas analíticas, torna-se necessário o desenvolvimento de métodos analíticos para o controle de qualidade microbiológico, físico-químicos e químico. Um destes medicamentos é a tintura de Alecrim-Pimenta, um extrato hidroalcóolico das folhas de Lippia sidoides. Este fitoterápico é utilizado como antisséptico para tratamento de machucados e feridas, sendo o seu princípio ativo o timol. O projeto foi motivado pela falta de relatos na literatura de um método validado para a padronização deste princípio ativo no fitoterápico. O método desenvolvido utiliza, para o preparo de amostra, a extração em fase sólida (SPE) com um cartucho de C18 e Metanol/Água como eluente, retendo o timol em uma fração. As condições de extração foram otimizadas via planejamento fatorial completo (2³), e os resultados analisados via superfície de resposta determinaram que esta região ocorreria com a utilização do volume inicial máximo de 1400 μL do extrato aplicado ao cartucho e sua eluição com o solvente Metanol:Água (80:20). O timol foi quantificado via método desenvolvido por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) com detector UV/Vis. As curvas de calibração foram lineares na faixa de trabalho de 0,1-1,0 mg/mL com alto coeficiente de determinação (0,997). Os limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ) foram 0,02 e 0,06 mg/mL, respectivamente. Já a precisão e exatidão apresentaram recuperações percentuais na faixa de 95,8-103,8 % para os três diferentes níveis de concentrações. Por fim, o método desenvolvido se mostrou robusto frente às múltiplas variações aplicadas, além de resultados satisfatórios dentro dos parâmetros analisados, tornando sua aplicação viável em Farmácias Vivas para garantir o controle de qualidade do extrato hidroalcóolico de L. sidoides como fitoterápico. Palavras-chave: Lippia sidoides. Timol. Padronização. SPE. CLAE. Validação analítica.

The use of phytoterapics in Brazil has been encouraged by the Unified Health System (SUS), through Living Pharmacies that produce and distribute these medicines to the general population. Phytoterapics are widely recognized for their traditional use, but there are few methodologies in the literature that guarantee their quality control. Thus, with the advancement of analytical techniques, it becomes necessary the development of analytical methods for microbiological, physicochemical and chemical quality control. One of these medicines is the Rosemary-Pepper tincture, a hydroalcoholic extract from the leaves of Lippia sidoides. This herbal medicine is used as an antiseptic for the treatment of injuries and wounds, and its active principle is thymol. The project was motivated by the lack of reports in the literature of a validated method for the standardizing of this active principle in the phytoterapic. The method developed uses, for sample preparation, solid phase extraction (SPE) with a C18 cartridge and Methanol/Water as eluent, retaining the thymol in a fraction. The extraction conditions were optimized via full factorial design (2³), and the results analyzed via the response surface determined that this region would occur with the use of the maximum initial volume of 1400 μL of extract applied to the cartridge and its elution with the solvent Methanol:Water (80:20). thymol was quantified via the method developed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with UV/Vis detector. Calibration curves were linear in the working range of 0.1-1.0 mg/mL with a high coefficient of determination (0.997). The limits of detection (LD) and quantification (LQ) were 0.02 and 0.06 mg/mL, respectively. The precision and accuracy presented percentage recoveries in the range of 95.8-103.8% for the three different levels of concentrations. Finally, the developed method proved to be robust against the multiple applied variations, in addition to satisfactory results within the analyzed parameters, making its application viable in Living Pharmacies to guarantee the quality control of the hydroalcoholic extract of L. sidoides as a phytoterapic. Keywords: Lippia sidoides. Thymol. Standardization. SPE. CLAE. Analytical validation.