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Tipo: Dissertação
Título: Efeito da Somatotropina Recombinante Bovina (rbST) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais de bovinos
Effect of Recombinant Bovine Somatotropin (rbST) on in vitro development of preantral follicles of cattle
Autor(es): Silva, Talita Fernandes da
Abstract: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da Somatotropina Recombinante Bovina (rbST) sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA) de bovinos cultivados in vitro. O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Federal de Viçosa. Os ovários foram obtidos de fêmeas bovinas abatidas em frigorífico e transportados ao laboratório em aproximadamente uma hora após a coleta. No laboratório, a região parenquimatosa foi fragmentada, sendo um dos fragmentos de cada ovário imediatamente fixado para Histologia Clássica (HC) e Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET), constituindo o controle não cultivado. Em seguida, os demais fragmentos/folículos foram cultivados in situ por um e sete dias, em estufa a 38,5oC e 5% de CO 2 , em Meio Essencial Mínimo suplementado (controle cultivado), na ausência ou presença de diferentes concentrações de rbST (10, 50, 100 e 1000ng/mL). A troca de meio foi realizada a cada dois dias. Após um e sete dias, os fragmentos ovarianos foram fixados e corados para posterior análise histológica. Nesta análise, os folículos foram classificados como normais ou degenerados, bem como primordiais ou ativados. O diâmetro folicular foi mensurado com auxílio de uma ocular micrométrica. Na avaliação ultraestrutural foi observada a integridade da membrana basal, das organelas citoplasmáticas e o grau de vacuolização citoplasmática. Após um e sete dias de cultivo in vitro, o percentual de folículos normais em fragmentos não cultivados foi superior (P<0,05) quando comparado aos folículos cultivados com o meio base e na presença das diferentes concentrações de rbST. Nenhuma das concentrações de rbST manteve as taxas de sobrevivência folicular após sete dias de cultivo. Quanto ao estádio de desenvolvimento, a ativação folicular ocorreu independente da presença da rbST no meio de cultivo. Apenas os folículos cultivados na presença de 1000ng/mL apresentaram o diâmetro dos ovócitos semelhante (P>0,05) ao do controle não cultivado, após um dia de cultivo. Após um e sete dias de cultivo, o diâmetro dos folículos cultivados na presença de 1000ng/mL de rbST foi superior (P<0,05) aos folículos cultivados apenas com o MEM + e com 10ng/mL de rbST. As características ultraestruturais demonstraram que após sete dias de cultivo em meio contendo 1000ng/mL de rbST, houve xidanos à membrana nuclear e basal, alteração nas células da granulosa, bem como aumento da vacuolização e baixa densidade de organelas no citoplasma. Conclui-se que as concentrações de 10, 50 e 100ng/mL de rbST não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência, a ativação e o crescimento de folículos pré-antrais de bovinos. A concentração de 1000ng/mL de rbST aumenta o diâmetro folicular, entretanto não tem efeitos benéficos sobre a sobrevivência e a ativação de folículos pré-antrais de bovinos cultivados in vitro durante um e sete dias.
The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant Bovine Somatotropin (rbST) on survival, activation and growth of Preantral Ovarian Follicles of cattle grown in vitro. The experiment was conducted at the Laboratory of Animal Reproduction, Federal University of Viçosa. Ovaries were obtained from cows slaughtered in a slaughterhouse and transported to the laboratory in approximately one hour after collection. In the laboratory, the parenchymal region was fragmented, being one of the fragments of each ovary immediately fixed for Histology Classic and Transmission Electron Microscopy, constituting the control. Then, the remaining fragments / follicles were cultured in situ for one and seven days in an incubator at 38.5°C and 5% CO 2 in Minimal Essential Medium supplemented (cultured control) in the absence or presence of different concentrations of rbST (10, 50, 100 and 1000ng/ml). The medium change was performed every two days. After one and seven days, ovarian fragments were fixed and stained for subsequent histological analysis. In this analysis, the follicles were classified as normal or degenerated, as well as primary or activated. Follicular diameter was measured with the aid of an ocular micrometer. In the ultrastructural evaluation, were analysed the integrity of the basement membrane, the cytoplasmic organelles and the degree of vacuolation. After one and seven days of in vitro culture, the percentage of normal follicles in not cultivated fragments was higher (P<0.05) when compared to follicles cultured with basal medium and in the presence of different concentrations of rbST. Neither concentration of rbST kept rates follicle viability after seven days. In relation the development, follicular activation occurred independent of the presence of rbST in the culture medium. Only follicles cultured in the presence of 1000ng/ml showed the diameter of oocytes similar (P>0.05) to the not cultived control, after one day. After one and seven days of cultivation, the diameter of follicles cultured in the presence of 1000ng/ml rbST was higher (P<0.05) to the found in only follicles cultured with MEM and 10ng/ml of rbST, respectively. Results showed that after seven days of culture in medium containing 1000 ng/ml rbST, there was damage to nuclear and basement membrane changes in granulosa cells as well as increased vacuolation and low density of organelles in the cytoplasm. It was concluded that concentrations of 10, 50 and 100 xiiing/ml rbST has no beneficial effect on survival, growth and activation of preantral follicles in cattle. The concentration of 1000ng/mL rbST increases follicular diameter, but has no beneficial effects on the survival and activation of preantral follicles in cultured bovine in vitro for one and seven days.
Palavras-chave: Bovinos - Reprodução
Oogênese
Somatotropina
Cultura in vitro
CNPq: Reprodução Animal
Editor: Universidade Federal de Viçosa
Citação: SILVA, Talita Fernandes da. Efeito da Somatotropina Recombinante Bovina (rbST) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais de bovinos. 2014. 34 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Veterinária) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2014.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/6628
Data do documento: 26-Out-2014
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