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Tipo: Tese
Título: Atividade ectonucleotidásica e localização celular das NTPDases nos tripanosomatídeos Trypanosoma cruzi e Leishmania tarentolae
Ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDases in tripanosomatids Trypanosoma cruzi and Leishmania
Autor(es): Valle, Myrian Augusta Araujo Neves
Abstract: Dentre as moléculas utilizadas pelos tripanosomatídeos para invadir a célula hospedeira estão as E-NTPDases, que são enzimas capazes de hidrolisar nucleotídeos tri e/ou difosfatados nos seus produtos monofosfatados. As propostas do presente trabalho foram avaliar a atividade ectonucleotidásica e a localização celular da NTPDase-1 nas cepas Berenice-62, Colombiana e nos clones CL-Brener e CL-14 de T. cruzi e das NTPDases em L. tarentolae, bem como a capacidade dessas enzimas em participar do processo de adesão. Além disto, avaliar o efeito da fase de crescimento, meio de cultura e choque térmico sobre a atividade e localização NTPDase-1 na cepa Colombiana. Os resultados deste trabalho mostraram de forma geral as atividades na fase logarítimica maiores que na fase estacionária. A NTPDase-1 participa da adesão dos parasitos da cepa Y. Pelas análises ultraestruturais da localização subcelular da NTPDase-1 foi possível observar marcações distribuídas em diversas regiões da célula. Quando se analisou a influência do meio de cultivo e choque térmico na atividade ectonucleotidásica de T. cruzi observou-se maior hidrólise dos nucleotídeos em meio Grace’s 20% SFB sem choque térmico, na fase exponencial. O choque térmico em meio LIT mostrou-se mais eficaz quando comparado à temperatura de 28°C e ao meio Grace’s 20% SFB. A inibição por suramina mostrou um perfil bem variado. A NTPDase-1 da cepa Colombiana participa da adesão celular. Em L. tarentolae os resultados confirmaram por microscopia eletrônica e confocal a presença das NTPDases em diversas organelas e na superfície celular, e mostraram uma preferência pela hidrólise de ATP tanto em formas procíclicas como metacíclicas. As NTPDases foram também parcialmente inibidas na presença de suramina. Além de participarem da adesão celular de L. tarentolae em macrófagos. Este trabalho mostrou a importância das E-NTPdases em tripanosomatídeos mesmo em espécie não patogênica para humanos.
Among the molecules used by trypanosomatids to invade the host cell are the E- NTPDase, enzymes capable of hydrolyze nucleotides tri and/or difosfatados in its monofosfatados products. . For this reason, the actual work aimed to assess the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDase-1 in both strains Berenice-62 and Colombian and in both clones CL-Brener and CL-14 of T. cruzi; besides, the ectonucleotidase activity and cellular localization of NTPDases in L. tarentolae, as well to investigate the role of these enzymes in the adhesion process. Furthermore, the effects of growth stage, growth medium and heat shock in the activity and localization of NTPDase-1 in the Colombian strain were also evaluated. The results have showed, in general, a higher activity in the logarithmic phase than in the stationary phase. The NTPDase-1 participates cellular adhesion of the parasites of the Y strain. Through ultrastructural analyses of subcellular localization of NTPDase-1 was possible to observe markings distributed on several regions of the cell. Besides, when analyzing the influence of growth medium and heat shock in ectonucleotidase activity of T.cruzi, the nucleotide hydrolyses increased in Grace’s medium 20% without heat shock and exponential phase. The heat shock seemed to be more effective in comparison to the 28°C heat shock in LIT medium. Inhibition by suramin displayed a well diverse profile. Thus, electronic and confocal microscopies confirmed the presence of NTPDases in diverse organelles as well in the cellular surface of Leishmania tarentolae, in addition to the preference for ATP hydrolyses in both procyclic and metacyclic forms of this parasite. Subsequently, the NTPDases were partially inhibited by suramin. Finally, was possible to confirm the involvement of NTPDases in macrophage adhesion process in L. tarentolae. These data suggest that E-NTPDases may be important proteins to the infection process of tripanosomatids including nonpathogenic species to humans.
Palavras-chave: Trypanossoma cruzi
Leishmania
Microscopia
Protozoário
Células - Metabolismo
CNPq: Biologia Geral
Editor: Universidade Federal de Viçosa
Citação: VALLE, Myrian Augusta Araujo Neves do. Atividade ectonucleotidásica e localização celular das NTPDases nos tripanosomatídeos Trypanosoma cruzi e Leishmania tarentolae. 2015. 90 f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Estrutural) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa. 2015.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/6899
Data do documento: 9-Set-2015
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