Organogênese in vitro na regeneração de clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla

Abstract

O presente estudo objetivou avaliar os efeitos dos reguladores de crescimento TDZ, BAP e ANA no desempenho da propagação in vitro por organogênese de explantes foliar e caulinar de três clones híbridos de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla. Os explantes foliar e caulinar obtidos de gemas alongadas in vitro foram cultivados em meio de cultura específico e submetidos, em cada fase distinta, a diferentes concentrações e tipos de reguladores de crescimento. Na fase de indução de calos, foram utilizadas combinações dos reguladores de crescimento TDZ e ANA e de BAP com ANA, sendo esta conduzida em regime de escuridão, pelo período de 35 dias. Na fase de regeneração de gemas, a partir do melhor tratamento obtido na fase de calejamento, avaliaram-se os reguladores de crescimento BAP e ANA, sendo conduzida em condições de fotoperíodo de 16 horas de luz e 8 horas de escuro, à irradiância de 36 mmol m-2 s-1, pelo período de 35 dias. De modo geral, pôde-se observar resposta diferenciada dos clones quanto a intensidade, textura, coloração e grau de oxidação dos calos, em função dos tratamentos com os reguladores de crescimento, tanto para explante foliar quanto caulinar. Para os três clones em estudo, os melhores resultados de calejamento foram observados nos tratamentos com a combinação dos reguladores de crescimento TDZ (0,5 mg L-1) e ANA (0,1 mg L-1), obtendo-se 100% de calejamento no explante foliar. Houve a formação de calo com aspecto nodular na região do pecíolo dos explantes foliares e de estruturas nodulares compactas, principalmente na extremidade dos explantes caulinares, sendo essas regiões responsáveis pela regeneração de gemas adventícias nos explantes foliares para o clone 1 e explantes caulinares para os clones 1 e 3. A melhor resposta de regeneração foi obtida com 1,0 mg L-1 BAP para o clone 1 utilizando-se explante foliar e para o clone 3, utilizando-se explante caulinar. As análises histológicas revelaram a origem adventícia das gemas diferenciadas a partir de explantes foliares e caulinares. Todavia, recomenda-se cautela quanto à utilização de explante caulinar na regeneração por organogênese in vitro, devido à possibilidade de inclusão acidental de gemas axilares durante a confecção dos explantes, aliado ao menor rendimento obtido, em comparação com explante foliar.

The effects of the growth regulators TDZ, BAP and ANA on the performance of in vitro propagation by organogenesis was evaluated for three hybrid clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla with leaf and stem explants. These leaf and stem explants were obtained by extended buds in vitro, cultivated in specific culture medium and treated, in each different phase, with different types and concentrations of growth regulators. Combinations of the growth regulators TDZ with ANA and BAP with ANA were used in the callus induction phase under darkness regime, for a period of 35 days. Based on the best treatment obtained during this phase of callus forming, the growth regulators BAP with ANA were evaluated for the phase of buds regeneration, under photoperiod conditions with 16 hours of light and 8 hours of darkness, with an irradiation of 36 mmol m-2s-1, for a period of 35 days. In general, a differentiated response of the clones in relation to intensity, texture, color and oxidation degree of the callus could be observed, due to the growth regulator treatments, for the leaf as well as for the stem explants. For the three examined clones, the best results in cluster forming were observed for the treatments with a combination of the growth regulators TDZ (0.5 mg L -1) and ANA (0.1 mg L-1), achieving 100% of callus forming in the leaf explant. Node formed callus appeared in the petiole region of the leaf explants, and compact node structures, mainly in the extremities of the stem explants. These regions are responsible for the regeneration of adventitious buds in the leaf explants for clone 1 and in the stem explants for clones 1 and 3. The best regeneration response was obtained with 1.0 mg L-1 BAP for clone 1, using leaf explant, and for clone 3, using stem explant. Histological analyses revealed the adventitious origin of the differentiated buds brought forth by leaf and stem explants. However, precaution is recommended in relation to the use of stem explants for regeneration by organogenesis in vitro, due to the possibility of accidental inclusions of axillary buds during the fabrication of the explants, whose production is lower, compared to that of the leaf explant.