Use este identificador para citar ou linkar para este item: https://locus.ufv.br//handle/123456789/4700
Tipo: Dissertação
Título: Determinação do conteúdo de DNA em pimentão (Capsicum annuum L.) por citometria de imagem
Título(s) alternativo(s): Image cytometric measurement of nuclear DNA content in pepper (Capsicum annuum L.)
Autor(es): Mendonça, Maria Andréia Corrêa
Primeiro Orientador: Carvalho, Carlos Roberto de
Primeiro avaliador: Otoni, Wagner Campos
Segundo avaliador: Cruz, Cosme Damião
Terceiro avaliador: Pompolo, Silvia das Graças
Quarto avaliador: Caixeta, Eveline Teixeira
Abstract: Capsicum é um dos gêneros mais importantes economicamente da família Solanaceae. Das 25 espécies descritas, cinco são extensivamente cultivadas. Capsicum annuum é a mais importante comercialmente, pelo seu valor agronômico como especiaria. Apesar da sua importância, valores de conteúdo de DNA conflitantes, que variam de 5,52 a 10,80 pg, têm sido descritos para essa espécie. Diante dos avanços dos equipamentos digitais nas análises de citometria de imagem, o presente trabalho propôs o estabelecimento desses recursos para reavaliar o tamanho do genoma em C. annuum. Os objetivos específicos foram: (i) o estabelecimento de parâmetros de confiabilidade para análises em citometria de imagem, por meio da realização de testes de estabilidade do equipamento, linearidade e uniformidade da densidade óptica integrada dos núcleos; (ii) aplicação dessa calibração em núcleos de eritrócitos de Gallus domesticus Leghorn (macho e fêmea); e (iii) desenvolvimento de metodologias de citometria de imagem para determinação do conteúdo de DNA em pimentão (C. annuum L. Fortuna Super ). Lâminas de esfregaço de sangue de galinha e galo submetidas à reação de Feulgen foram utilizadas nos testes de calibração e para a determinação da densidade óptica integrada. As preparações citogenéticas de pimentão foram feitas pela técnica de esmagamento de meristemas radiculares submetidos à reação de Feulgen. Uma vez estabelecidos os parâmetros de confiabilidade para a realização da citometria de imagem, a aplicação dessas padronizações em análises de núcleos de eritrócitos de ave permitiu identificar diferenças de 4,32% no conteúdo de DNA nuclear entre machos e fêmeas de G. domesticus. Análise de variância demonstrou que a diferença encontrada era significativa, e essa foi atribuída ao heteromorfismo dos cromossomos sexuais. As análises de citometria de imagem em C. annuum permitiram o cálculo da densidade óptica integrada, atendendo aos parâmetros internacionalmente adotados para esse tipo de estudo. O conteúdo de DNA estimado para C. annuum Fortuna Super , utilizando Pisum sativum Ctirad com o padrão interno, foi de 8,10 pg. Esse valor difere em 2% do obtido previamente por citometria de fluxo, utilizando-se material nuclear foliar da mesma população de plantas. Além disso, o valor obtido difere em 16% e 28% dos valores 2C obtidos por citometria de imagem descritos na literatura e em 7% e 32% dos relatados por citometria de fluxo. Esses resultados abrangem informações acerca do genoma dessa espécie, que podem ser úteis em programas de melhoramento e seqüenciamento e em estudos evolutivos.
Capsicum genus is one of the most important members of the Solanaceae family with high economic value. Out of 25 known species, five are extensively cultivated. Capsicum annuum is the most important commercially by its agronomic value as spice. In despite of this importance, the nuclear DNA content of C. annuum is still uncertain with values from the literature ranging from 5.52 to 10.80 pg. In face of the fast development of digital image technologies in cytometry, this study proposes the utilization of these resources to reevaluate the genomic size in C. annuum. The specific objectives were: (i) to determine the reliability parameters for image cytometry analysis by performing tests of equipment stability, linearity and uniformity of nuclei integrated optical density; (ii) to apply that parameters in analysis of erythrocytes nuclei from Gallus domesticus 'Leghorn' (male and female); and (iii) to develop image cytomery methodologies for determination of the nuclear DNA content of pepper (C. annuum L. 'Fortuna Super'). Hen and rooster blood samples were prepared by using the method of smear preparation. The slides were stained with Feulgen reaction and they were used to perform the quality control procedures and integrated optical density measurements. Root tips of C. annuum were fixed, stained with Feulgen reaction and squashed on a microscope slide. Once the parameters of the reliability for performing image cytometry were established, the application of those standardizations in the chicken red blood cells suggested that this technique allows identification of differences in the nuclear DNA content between rooster and hen. Analysis of variance demonstrated that the 4.32% difference obtained was significant and it was attributed to sexual chromosomes heteromorfism. C. annuum analyses allowed the calculation of integrated optical density values, and they were in iccordance with the international standards for DNA image cytometry. The 2C DNA value for C. annuum 'Fortuna Super', using Pisum sativum as the internal standard, was 8.10 pg. This data differs in 2% from the previously obtained by flow cytometry for the same plant population. Besides, the value obtained in this study differs in16% and 28% from those 2C values previously published by image cytometry and in 7% and 32% for flow cytometry. These results include information about C. annuum genome that can be useful in breeding programs, genome sequencing projects and for comparative studies of genome evolution.
Palavras-chave: Pimentão
Citometria de imagem
Quantificação de DNA
Capsicum annuum
Green pepper
Image cytometry
DNA quantification
Capsicum annuum
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA VEGETAL
Idioma: por
País: BR
Editor: Universidade Federal de Viçosa
Sigla da Instituição: UFV
Departamento: Genética animal; Genética molecular e de microrganismos; Genética quantitativa; Genética vegetal; Me
Programa: Mestrado em Genética e Melhoramento
Citação: MENDONÇA, Maria Andréia Corrêa. Image cytometric measurement of nuclear DNA content in pepper (Capsicum annuum L.). 2006. 65 f. Dissertação (Mestrado em Genética animal; Genética molecular e de microrganismos; Genética quantitativa; Genética vegetal; Me) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2006.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://locus.ufv.br/handle/123456789/4700
Data do documento: 3-Fev-2006
Aparece nas coleções:Genética e Melhoramento

Arquivos associados a este item:
Arquivo Descrição TamanhoFormato 
texto completo.pdf561,69 kBAdobe PDFThumbnail
Visualizar/Abrir


Os itens no repositório estão protegidos por copyright, com todos os direitos reservados, salvo quando é indicado o contrário.